Penyimpanan sampel bakteri pada suhu 2–8°C merupakan prosedur umum di laboratorium mikrobiologi untuk mempertahankan viabilitas Staphylococcus aureus, namun durasi penyimpanan yang terlalu lama berpotensi menurunkan jumlah koloni dan mempengaruhi keakuratan hasil kultur. Penelitian ini bertujuan menganalisis pengaruh lama waktu penyimpanan pada suhu 2–8°C terhadap viabilitas Staphylococcus aureus menggunakan metode Total Plate Count dengan variasi waktu 0 jam, 4 jam, 8 jam, dan 24 jam. Desain penelitian menggunakan Posttest Only Control Group Design dengan jumlah sampel 60 yang ditentukan melalui perhitungan G-Power. Hasil penelitian menunjukkan adanya pengaruh signifikan lama waktu penyimpanan terhadap viabilitas bakteri (p = 0,025). Uji Least Significant Different (LSD) menunjukkan perbedaan signifikan pada 24 jam dibandingkan 0 jam (p = 0,008), 4 jam (p = 0,011), dan 8 jam (p = 0,024), sedangkan penyimpanan hingga 8 jam tidak menunjukkan perbedaan bermakna (p > 0,05). Oleh karena itu, perlakuan pada suhu 2-8ºC masih dapat mempertahankan viabilitas bakteri hingga 8 jam, namun terjadi penurunan yang signifikan setelah 24 jam.