Pemantapan mutu internal merupakan upaya untuk menjamin kualitas hasil pemeriksaan laboratorium, Assayed serum control digunakan untuk memantau ketelitian dan ketepatan pemeriksaan, namun penyimpanan pada suhu ruang dapat memengaruhi stabilitas analit. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh lama penyimpanan assayed serum control pada suhu ruang terhadap reliabilitas quality control pemeriksaan bilirubin total. Penelitian ini merupakan penelitian eksperimental dengan pengukuran berulang menggunakan assayed serum control level normal dan patologis pada waktu penyimpanan 0, 4, dan 8 jam. Evaluasi dilakukan berdasarkan nilai Koefisien Variasi (KV%), bias, Total Error (TE), grafik Levey-Jenning’s, dan aturan Westgard. Data dianalisis menggunakan Repeated Measures ANOVA. Hasil penelitian menunjukkan terdapat pengaruh lama penyimpanan terhadap kadar bilirubin total pada level normal (p=0,009) dan level patologis (p<0,001). Nilai CV seluruh perlakuan masih memenuhi batas penerimaan (<5%) dan nilai TE berada di bawah TEa. Evaluasi Levey-Jenning’s menunjukkan bahwa hasil kontrol kualitas tetap berada dalam batas kendali pada level normal, tetapi ditolak (out of control) pada level patologis mulai jam ke-4. Meskipun terjadi kehilangan kendali statistik tersebut, total error tetap berada di bawah ambang batas Total Allowable Error (TEa) pada kedua level selama periode 8 jam, yang mengindikasikan bahwa status kendali Westgard dan total error menilai aspek kualitas analitik yang berbeda namun saling melengkapi. Dapat disimpulkan bahwa durasi penyimpanan memengaruhi reliabilitas kontrol kualitas bilirubin total, khususnya pada level patologis, dan bahwa penetapan durasi penyimpanan yang dapat diterima sebaiknya mempertimbangkan level kontrol dan kriteria QC, bukan berdasarkan batas waktu tunggal yang seragam.